The blotting technique used to identify the isolated protein is / पृथक प्रोटीन की पहचान करने के लिए प्रयुक्त ब्लॉटिंग तकनीक है

The blotting technique used to identify the isolated protein is / पृथक प्रोटीन की पहचान करने के लिए प्रयुक्त ब्लॉटिंग तकनीक है

 

(1) Northern blotting / उत्तरी सोख्ता
(2) Western blotting / पश्चिमी सोख्ता
(3) Southern blotting / दक्षिणी सोख्ता
(4) Cloning / क्लोनिंग

(SSC CGL Tier-I (CBE) Exam.30.08.2016)

Answer / उत्तर :-

(2) Western blotting / पश्चिमी सोख्ता

 

 

Explanation / व्याख्या :-

प्रोटीन वैद्युतकणसंचलन और पश्चिमी सोख्ता दोनों एक नमूने या समाधान में विशिष्ट प्रोटीन की पहचान करने के लिए उपयोग की जाने वाली विधियाँ हैं। पश्चिमी सोख्ता, जिसे इम्युनोब्लॉटिंग या प्रोटीन सोख्ता के रूप में भी जाना जाता है, कोशिका और आणविक जीव विज्ञान में एक मुख्य तकनीक है। सबसे बुनियादी शब्दों में, इसका उपयोग कोशिकाओं से निकाले गए जटिल मिश्रण में एक विशिष्ट प्रोटीन की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है।

पश्चिमी धब्बा एक प्रयोगशाला विधि है जिसका उपयोग प्रोटीन के मिश्रण में से विशिष्ट प्रोटीन अणुओं का पता लगाने के लिए किया जाता है। इस मिश्रण में एक विशेष ऊतक या कोशिका प्रकार से जुड़े सभी प्रोटीन शामिल हो सकते हैं। पश्चिमी धब्बा का उपयोग रुचि के प्रोटीन के आकार का मूल्यांकन करने और प्रोटीन अभिव्यक्ति की मात्रा को मापने के लिए भी किया जा सकता है। इस प्रक्रिया का नाम दक्षिणी धब्बा के रूप में ज्ञात पहले से आविष्कृत विधि से इसकी समानता के लिए रखा गया था।

पश्चिमी धब्बा में पहला कदम प्रोटीन के नमूने को सोडियम डोडेसिल सल्फेट नामक डिटर्जेंट के साथ मिलाकर तैयार करना है, जो प्रोटीन को रैखिक श्रृंखलाओं और कोटों में एक नकारात्मक चार्ज के साथ प्रकट करता है। इसके बाद, प्रोटीन अणुओं को उनके आकार के अनुसार जेल वैद्युतकणसंचलन नामक विधि का उपयोग करके अलग किया जाता है। पृथक्करण के बाद, प्रोटीन को जेल से एक सोख्ता झिल्ली पर स्थानांतरित कर दिया जाता है। यद्यपि यह कदम तकनीक को “पश्चिमी सोख्ता” नाम देता है, इस शब्द का प्रयोग आमतौर पर पूरी प्रक्रिया का वर्णन करने के लिए किया जाता है।

एक बार स्थानांतरण पूरा हो जाने पर, झिल्ली सभी प्रोटीन बैंडों को मूल रूप से जेल पर ले जाती है। इसके बाद, झिल्ली ब्लॉकिंग नामक उपचार से गुजरती है, जो किसी भी गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया को होने से रोकता है। झिल्ली को तब प्राथमिक एंटीबॉडी नामक एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है, जो विशेष रूप से ब्याज की प्रोटीन से बांधता है। ऊष्मायन के बाद, किसी भी अनबाउंड प्राथमिक एंटीबॉडी को धोया जाता है, और झिल्ली को फिर से ऊष्मायन किया जाता है, लेकिन इस बार एक माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ जो विशेष रूप से प्राथमिक एंटीबॉडी को पहचानता है और बांधता है। द्वितीयक एंटीबॉडी एक रिपोर्टर एंजाइम से जुड़ा होता है जो रंग या प्रकाश पैदा करता है, जो इसे आसानी से पता लगाने और इमेज करने की अनुमति देता है। ये चरण प्रोटीन के मिश्रण में से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने की अनुमति देते हैं।

Protein electrophoresis and Western blotting are both methods used to identify specific proteins in a sample or solution. Western blotting, also known as immunoblotting or protein blotting, is a core technique in cell and molecular biology. In most basic terms, it is used to detect the presence of a specific protein in a complex mixture extracted from cells.

western blot is a laboratory method used to detect specific protein molecules from among a mixture of proteins. This mixture can include all of the proteins associated with a particular tissue or cell type. Western blots can also be used to evaluate the size of a protein of interest, and to measure the amount of protein expression. This procedure was named for its similarity to the previously invented method known as the Southern blot.

The first step in a western blot is to prepare the protein sample by mixing it with a detergent called sodium dodecyl sulfate, which makes the proteins unfold into linear chains and coats then with a negative charge. Next, the protein molecules are separated according to their sizes using a method called gel electrophoresis. Following separation, the proteins are transferred from the gel onto a blotting membrane. Although this step is what gives the technique the name “western blotting,” the term is typically used to describe the entire procedure.

Once the transfer is complete, the membrane carries all of the protein bands originally on the gel. Next, the membrane goes through a treatment called blocking, which prevents any nonspecific reactions from occurring. The membrane is then incubated with an antibody called the primary antibody, which specifically binds to the protein of interest. Following incubation, any unbound primary antibody is washed away, and the membrane is incubated yet again, but this time with a secondary antibody that specifically recognizes and binds to the primary antibody. The secondary antibody is linked to a reporter enzyme that produces color or light, which allows it to be easily detected and imaged. These steps permit a specific protein to be detected from among a mixture of proteins.